融合蛋白純化

2．1 IMAC是Porath et al.1975年用固定IDA作為配基的填料螯合過渡金屬銅、鎳、鈷或鋅離子，可以吸附純化表面帶組氨酸、色氨酸或半胱氨酸殘基的蛋白，1987年Smith et al. 發現帶有幾個組氨酸或色氨酸小肽和螯合金屬離子的IDA-sephadex G-25作用力更強，此前在1986年他和他的合作者用Ni2+-IDA-sephadex G-25親和純化在氨基端帶組氨酸和色氨酸的胰島素原。同年1987年Hochuli et al.發現帶有相連組氨酸的多肽多肽合成儀和Ni2+-NTA填料作用力更強于普通的肽，1988年他第一次用這樣的方法純化了帶六個組氨酸標籤的多肽，無論是在天然還是變性條件下一次親和純化都得到很好效果，此後表達帶六個組氨酸標籤的蛋白配合IMAC變得非常普遍，相對而言，不帶標籤的蛋白純化就非常困難，所以表達帶六個組氨酸標籤的蛋白配合IMAC純化變成最常用而且最有效的研究蛋白多肽合成儀結構和功能的有力手段。1986年Porath et al.還發現Fe3+-IDA-sephadex G-25可以用於磷酸化蛋白的純化，而後發現Ga3+-IDA也有同樣的效果，這樣螯合這兩種金屬離子的填料就有效用於磷酸化多肽的富集和純化，同時IMAC也可以用於純化各種和金屬離子結合的多肽，應用非常廣泛。

His-Tag融合蛋白是目前最常見的表達方式，而且很成熟，它的優點是表達方便而且基本不影響蛋白的活性，無論是表達的蛋白是可溶性的或者包涵體都可以用固定金屬離子親和色譜去（IMAC）純化。