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蛋白質濃度測定
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試劑加完後,準確吸取20μl樣品溶液于酶標孔中,加入BCA試劑200μl,輕搖,於37℃保溫30-60min,冷卻至室溫後,以空白為對照,在酶標儀上590nm處比色,以牛血清白蛋白含量為橫坐標,以吸光值為縱坐標,繪製標準曲線。以標準曲線空白為對照,根據樣品的吸光值從標準曲線上查出樣品的蛋白質含量。
二價銅離子在鹼性的條件下,可以被蛋白質還原成一價銅離子,一價銅離子和獨特的(含有BCA)相互作用產生敏感的顏色反應。兩分子的BCA螯合一個銅離子,形成紫色的反應複合物。該水溶性的複合物在562nm處顯示強烈的吸光性,吸光度和蛋白濃度在廣泛範圍內有良好的線性關係,因此根據吸光值可以推算出蛋白濃度。