瓊脂免疫擴散試驗

材料與試劑1．瓊脂粉2．平皿3．打孔器4．生理鹽水或其他緩衝液，可加1/萬的硫柳汞或疊氮鈉防腐。操作方法1．稱取一定量的瓊脂粉，按1%左右（0.8％～1.5%）的比例加入生理鹽水或緩衝液，水浴煮沸融化20min。2．將融化的瓊脂倒入平皿內，使厚度2mm～3mm。自然冷卻。3．根據要求（孔徑即孔的直徑，孔距即兩孔圓心之間的距離，包括兩孔的半徑）按範本打孔。也可直接用組合打孔器打孔。現在一般多打成梅花形孔圖。4．挑出孔內瓊脂，注意不要挑破孔緣。5．在火焰上緩緩加熱，使孔底邊緣的瓊脂少許熔化，以封底，以免加樣後液體從孔底滲漏。6．以毛細滴管吸取樣品加入孔內，注意不要產生氣泡，以加滿為度。加少了，影響反應程度，加多了，易溢出，也影響反應結果。7．加畢後，蓋上平皿蓋，將平皿翻過來，置濕盤中，37℃自由擴散24h～48h。

注意事項1．不規則的沉澱線可能是加樣過滿溢出、孔型不規則、邊緣開裂、孔底滲漏、孵育時沒放水準、擴散時瓊脂變乾燥、溫度過高蛋白質變性或未加防腐劑導致細菌污染等所致。2．抗原抗體的比例與沉澱帶的位置、清晰度有關。如抗原過多，沉澱帶向抗體孔偏移和增厚，反之亦然。可用不同稀釋度的反應液試驗後調節。