熱鹽水試驗

熱鹽水試驗檢查過程：1. 樣本處理：a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗淨血水，濾紙吸幹，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內。加入1.0 mL預冷的Lysis Buffer，再加入50ul Reagent A ， 0℃冰浴中上下研磨組織20次;有未研磨開的組織，可用雙層紗布過濾。b. 培養細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌，800 × g 5~10 min離心收集細胞。計數。每次提取需要5 × 107個細胞，加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞，再加入50ul Reagent A，將細胞懸液轉移到小容量玻璃勻漿器內，0℃冰浴研磨細胞20~30次。2. 將組織或細胞勻漿物轉移到1.5ml離心管中，4℃，700× g 離心5 min。細胞核沉澱在收集管底部，棄上清。加入0.5 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸沉澱;3. 取另一新離心管內加入0.5 mL Medium Buffer，吸取上一步的重懸液，沿管壁小心地加入到此離心管中,置於Medium Buffer之上,4℃， 700 × g 離心5min。將上清轉移到新離心管，細胞核沉澱在管底;5. 棄上清，在細胞核沉澱中加入0.5 mL Lysis Buffer重懸細胞核沉，1000 × g 離心10min ，棄上清，得較純的細胞核沉澱;6. 用50-100μL Store Buffer 或合適的反應緩衝液重懸細胞核沉澱，立即使用或-70℃保存

熱鹽水試驗注意事項：不合宜人群：無。檢查前禁忌：檢查前一天不吃過於油膩、高蛋白食物，避免大量飲酒。血液中的酒精成分會直接影響檢驗結果。體檢前一天的晚八時以後，應禁食。檢查時要求：　1. 為保證獲得完整的細胞核，第一是全程低溫操作。第二是快速。第三，在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞是製備細胞核的最關鍵環節。與組織塊相比，培養細胞特別是貼壁培養細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴密的研杵上下研磨培養細胞。2. 以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據此精確計算離心速度。3. 進行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩衝液裂解細胞核。