血清脂蛋白電泳原理和操作方法

血清脂蛋白， 當前在臨床應用方面， 它的作用還是比較大的， 所以對於很多的患者， 就想全面瞭解一下血清脂蛋白電泳原理和操作方法， 為了你能儘快的瞭解， 下面內容就做了詳細的介紹， 你可以充分的瞭解一下， 相信會對自己以後有幫助.

原理

脂蛋白是在鹼性pH條件下， 以瓊脂糖凝膠或醋酸纖維條帶作為載體， 從陽性方向來進行分離的。 形成的蛋白區帶可以用脂肪染料如蘇丹黑或者油紅染色， 它們只用於脂蛋白染色。 在瓊脂中可能會有附加的聚陰離子和二價陽離子沉澱。 脂蛋白沉澱帶用光密度計可立即定量分析。 脂蛋白區帶也可以被切開後重新溶解， 對各區帶進行膽固醇濃度的直接酶法檢測。 另外， 有報導在用薄層瓊脂糖凝膠上進行電泳分離後， 可直接檢測各脂蛋白組分中的膽固醇含量的方法。

操作方法

(1)將緩衝液加入電泳槽內，

調節兩側槽內的緩衝液， 使其處於同一平面。

(2)醋酸纖維素薄膜的準備：取醋酸纖維素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(負極側)1.5cm處用鉛筆輕劃一橫線， 做點樣標記。 編號， 並標明正、負極後， 將薄膜置於巴比妥-巴比妥鈉緩衝液中浸泡， 待充分浸透後(一般為20min)取出， 夾于潔淨濾紙中間吸去多餘的緩衝液。

(3)將醋酸纖維素薄膜毛面向上貼於電泳槽支架上拉直。 用微量吸管吸取無溶血血清3～5μl於橫線處沿橫線加樣， 樣品應與薄膜的邊緣保持一定的距離， 以免電泳圖譜中的蛋白區帶變形， 待血清滲入薄膜後， 反轉薄膜， 使光面朝上， 平直地貼於電泳槽支架上， 用雙層濾紙或四層紗布將薄膜的兩端與緩衝液連通， 稍待片刻。

(4)接通電源， 注意醋酸纖維素薄膜上的正、負極，

切勿接錯。 電壓90～150V， 電流0.4～0.6mA/cm(不同的電泳儀所需電壓， 電流可能不同， 應靈活掌握)， 夏季通電45min， 冬季通電時間稍長， 約為60min， 電泳區帶展開約25～35mm即可。

(5)染色：通電完畢， 取下薄膜直接浸於麗春紅S染液或氨基黑10B染色液中， 染色5～10min(以白蛋白區帶染透為止)， 然後在漂洗液中漂去剩餘染料， 直至背景無色為止。

(6)定量：

①比色法：將漂洗的薄膜吸幹， 剪下各染色的蛋白區帶入相應的試管中， 在白蛋白管中加0.4mol/L氫氧化鈉6ml(計算時吸光度乘以2)， 其餘各管加3ml， 振搖數次， 置37℃水箱20min使其色澤浸出。 氨基黑10B染色用分光光度計在620nm處讀取各管吸光度， 然後計算出各管的含量(同時做空白管對照)。

麗春紅S染色時浸出液用0.1mol/L氫氧化鈉， 加入量同上法。 10min後， 白蛋白管內加400ml/L醋酸0.6ml(計算吸光度時乘以2)，

其餘各管加0.3ml， 以中和部分氫氧化鈉， 使色澤加深， 必要時離心， 取上清液用分光光度計在520nm處讀取各管的吸光度(同時作空白對照)， 然後計算各自的含量。

②光密度計掃描法：A.透明：吸去薄膜上的漂洗液(為防止透明液被稀釋影響透明結果)， 將薄膜浸入透明液中2～3min， 然後取出， 以滾動的方式平貼于潔淨無劃痕的載物玻璃片上(切勿產生氣泡)， 將此玻片豎立片刻， 除去多餘透明液後， 置於恒溫90～100℃的烘箱內， 烘烤10～15min， 取出冷卻至室溫， 用此法透明的各蛋白區帶鮮明， 薄膜平整， 可供直接掃描和永久保存(用氫萘或液體石蠟透明， 應將漂洗過的薄膜烘乾後進行透明， 此法透明的薄膜不能存久， 且易發生皺折)。

②掃描定量：將已透明的薄膜放入全自動光密度計或其他光密度計暗箱內， 進行掃描分析。

血清脂蛋白電泳原理和操作方法， 本篇的內容就為很多的患者， 做了詳細的介紹， 所以要想全面的瞭解， 可以通過以上的介紹， 具體的瞭解一下它的原理， 以及操作的方法， 相信通過瞭解， 就能具體對原理和操作方法有一個充分的認識。