分離純化蛋白質方法有哪些

日常的生活當中， 身體的一些結構成分以及分子量成分， 是我們不太瞭解的， 因為不瞭解所以才會讓人不認識， 產生一些分歧， 給人們的身體也會造成影響， 其實分離純化蛋白質的方法， 可以通過瞭解分離方法以及具體的組合成分進行相應的判斷， 只有瞭解到這方面的問題， 才能知道究竟是如何組成的。

分離方法

透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。

超濾法

應用正壓或離心力使蛋白質溶液透過有一定截留分子量的超濾膜， 達到濃縮蛋白質溶液的目的。

丙酮、乙醇等有機溶劑沉澱法， 可破壞蛋白質的水化層， 在0~4℃低溫下， 使蛋白質沉澱。 環境溫度高等不良因素影響下， 有機溶劑可促使蛋白質變性。

鹽析(salt precipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質溶液， 使蛋白質表面電荷被中和以及水化膜被破壞， 導致蛋白質沉澱。

免疫沉澱法:利用特異抗體識別相應的抗原蛋白， 並形成抗原抗體複合物的性質， 可從蛋白質混合溶液中分離獲得抗原蛋白。

電泳法:蛋白質在高於或低於其pI的溶液中為帶電的顆粒， 在電場中能向正極或負極移動。 這種通過蛋白質在電場中泳動而達到分離各種蛋白質的技術, 稱為電泳(elctrophoresis) 。 幾種重要的蛋白質電泳:

電泳操作

SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳， 常用於蛋白質分子量的測定。

等電聚焦電泳， 通過蛋白質等電點的差異而分離蛋白質的電泳方法。

雙向凝膠電泳是蛋白質組學研究的重要技術。

層析(chromatography)或色譜法:待分離蛋白質溶液(流動相)經過一個固態物質(固定相)時， 根據待分離蛋白質的顆粒大小、電荷多少及親和力等， 使蛋白質組分在兩相中反復分配， 並以不同速度流經固定相而分離蛋白質。 凝膠過濾(分子篩， gel filtration;排阻色譜):利用各蛋白質分子大小不同分離。

離子交換:蛋白質的電荷量及性質不同。

陽離子交換劑:CM-纖維素

陰離子交換劑:DEAE-纖維素

親和層析:抗原-抗體， 配體-受體， 金屬離子， 生物素等

高效液相(HPLC):反相HPLC， 離子HPLC， 凝膠過濾HPLC

超速離心法(ultracentrifugation):根據蛋白質的分子量與形狀分離。