蛋白純化方法大全

蛋白純化的技術很複雜， 以下就會大家熟知蛋白純化步驟。 那為什麼蛋白質要純化呢， 去掉蛋白質含有的一些雜質與其他蛋白質一起沉澱。 那麼又要去除蛋白質的雜質又要保證蛋白質的營養不被流失， 於是就要製作不同的方案來應對， 稱為蛋白純化技術。 根據蛋白的相似度和差異去除蛋白中的雜質!

1、粗分級分離

當蛋白質提取液(有時還雜有核酸、多糖之類)獲得後， 選用一套適當的方法， 將所要的蛋白與其他雜蛋白分離開來。 一般這一步的分離用鹽析、等電點沉澱和有機溶劑分級分離等方法。 這些方法的特點是簡便、處理量大， 既能除去大量雜質， 又能濃縮蛋白溶液。 有些蛋白提取液體積較大， 又不適於用沉澱或鹽析法濃縮， 則可採用超過濾、凝膠過濾、冷凍真空乾燥或其他方法進行濃縮。

2樣品經粗分級分離以後， 一般體積較小， 雜蛋白大部分已被除去。

進一步純化， 一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。 必要時還可選擇電泳法， 包括區帶電泳、等電點聚焦等作為最後的純化步驟。 用於細分級分離的方法一般規模較小， 但解析度很高。

3結晶是蛋白質分離純化的最後步驟。 儘管結晶過程並不能保證蛋白一定是均一的， 但是只有某種蛋白在溶液中數量上佔有優勢時才能形成結晶。 結晶過程本身也伴隨著一定程度的純化， 而重結晶又可除去少量夾雜的蛋白。 由於結晶過程中從未發現過變性蛋白， 因此蛋白的結晶不僅是純度的一個標誌， 也是斷定製品處於天然狀態的有力指標。

41.機械破碎法

這種方法是利用機械力的剪切作用，

使細胞破碎。 常用設備有， 高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。

2.滲透破碎法

這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。

3.反復凍融法

生物組織經凍結後， 細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破。 這種方法簡單方便， 但要注意那些對溫度變化敏感的蛋白質不宜採用此法。

4.超聲波法

使用超聲波震盪器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。

以上就是蛋白純化的步驟， 給大家瞭解一下。 這項技術目前在國內越來越先進， 去除蛋白中的雜質讓蛋白更純粹。 這是一項很複雜的技術有興趣的人可以多學習， 要分離蛋白中的雜質還要純化裡面的蛋白， 要製作出不同的方案， 所以這項技術目前不斷的發展， 未來蛋白純化的技術會越來越好。