聚丙烯醯胺凝膠電泳

聚丙烯醯胺凝膠電泳， 這是一種用聚丙烯醯胺凝膠作支援介質的常用的電泳技術。 它常常用來分離寡合苷酸以及蛋白質。 它常作為陰離子的去污劑， 能夠作為助溶試劑和變形劑。 在濃縮膠的作用裡面經常提到堆積的作用。 濃度比較小的時候， 孔徑就會比較大， 下面我們來瞭解一下這方面的內容。

簡介

作用原理：聚丙烯醯胺凝膠為網狀結構， 具有分子篩效應。 它有兩種形式：非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳(Native-PAGE)和SDS-聚丙烯醯胺凝膠(SDS-PAGE);非變性聚丙烯醯胺凝膠， 在電泳的過程中， 蛋白質能夠保持完整狀態， 並依據蛋白質的分子量大小、蛋白質的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。

而SDS-PAGE僅根據蛋白質亞基分子量的不同就可以分開蛋白質。 該技術最初由shapiro于1967年建立， 他們發現在樣品介質和丙烯醯胺凝膠中加入離子去污劑和強還原劑(SDS即十二烷基硫酸鈉)後，

蛋白質亞基的電泳遷移率主要取決於亞基分子量的大小(可以忽略電荷因素)。

作用

SDS是陰離子去污劑， 作為變性劑和助溶試劑， 它能斷裂分子內和分子間的氫鍵， 使分子去折疊， 破壞蛋白分子的二、三級結構。 而強還原劑如巰基乙醇， 二硫蘇糖醇能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。

在樣品和凝膠中加入還原劑和SDS後， 分子被解聚成多肽鏈， 解聚後的氨基酸側鏈和SDS結合成蛋白- SDS膠束， 所帶的負電荷大大超過了蛋白原有的電荷量， 這樣就消除了不同分子間的電荷差異和結構差異。

SDS-PAGE一般採用的是不連續緩衝系統，

與連續緩衝系統相比， 能夠有較高的解析度。

濃縮膠的作用是有堆積作用， 凝膠濃度較小， 孔徑較大， 把較稀的樣品加在濃縮膠上， 經過大孔徑凝膠的遷移作用而被濃縮至一個狹窄的區帶。 當樣品液和濃縮膠選TRIS/HCl緩衝液， 電極液選TRIS/甘氨酸。 電泳開始後， HCl解離成氯離子， 甘氨酸解離出少量的甘氨酸根離子。 蛋白質帶負電荷， 因此一起向正極移動， 其中氯離子最快， 甘氨酸根離子最慢， 蛋白居中。 電泳開始時氯離子泳動率最大， 超過蛋白， 因此在後面形成低電導區， 而電場強度與低電導區成反比， 因而產生較高的電場強度， 使蛋白和甘氨酸根離子迅速移動， 形成一穩定的介面， 使蛋白聚集在移動介面附近，

濃縮成一中間層。

此鑒定方法中， 蛋白質的遷移率主要取決於它的相對分子品質， 而與所帶電荷和分子形狀無關。