硝酸纖維素的使用技巧是什麼？

硝酸纖維素是一種白色的聚合物，這種物質其實有很多稱呼，比如又被人們稱為纖維素硝酸脂，其英文簡稱是nc，這種化學物質有很多特點，比如被陽光照射之後容易變色，還具有容易燃燒的特點，所以其實硝酸纖維素是一種危險品，平時使用的時候一定要謹慎，下面為大家介紹硝酸纖維素的正確使用方法。

硝酸纖維素膜的應用技巧：

1.蛋白與膜的結合原理

蛋白與膜的結合原理，已知的結合力包括疏水作用力H鍵靜電作用力等，確切的結合原理並不明確，主要靠假說來支撐.主要有兩種假說：

1)首先兩者靠靜電作阻力結合，然後靠H鍵和疏水作用來維持長時間結合.

2)首先兩者靠疏水作用結合，然後靠靜電作用來維持長時間結合.

兩條假說，都表明其結合過程分為兩步，首先結合和後面長時間結合.由於結合原理的不明確性，導致在這方面的工作非常依賴實踐經驗.

2.膜對結合的影響

1)膜孔徑

有些技術人員傾向使用膜孔徑來區分不同的膜，但是請注意這只僅僅限於同一廠家的產品，如果是不同廠家的產品，這種比較是無意義的.膜孔徑與層析速度的關係，已在上文描述.

隨著膜孔徑減小，膜的實際可用表面積遞增，膜結合蛋白的量也遞增.估量表面積的參數為表面積比率(實際可用表面積與所用膜平面積的比率).

另外，膜孔徑越小，層析速度也越小，那麼金標複合物通過T線的時間也就越長，反應也就越充分.

綜合以上兩點，結論為膜孔徑越小靈敏度越高.但是同時也減慢了跑板速度，增加了非特異性結合的機會，也就是假陽性越高.所以要按照試驗結果挑選適合實際專案的膜，找到合適的平衡點.

2)不同廠家的膜差異

這個差異主要來源於兩點：

1>生產膜時，使用的聚合物和表面活性劑的來源，類型，數量不同.同理，在膜處理中這兩類物質一般會對性能產生較大影響.

2>處理過程不同.

3.生物原料，緩衝溶液的試劑和配方

1)生物原料，作為CT線的生物原料使用情況各異，所以這裡只做略述.

首先，單克隆抗體與膜的結合優於多克隆抗體，主要時由於多克隆抗體有很多不同的表面位點，而各位點與膜的最佳結合條件都有細微的差別，毫無疑問就增加了優化難度.

其次，分子量越大，蛋白越難結合到固相材料上.

2)緩衝液

大家最關心的可能就是希望獲得一個性能優良的配方，包括緩衝液，封閉液等等處理溶液配方.

其實也無法提供給一個萬用配方清單.因為不同的反應體系需要不同的配方來支援，而不同機構的反應體系又有差異.想獲”魚”先學”漁”.為了不誤導大家，在下面涉及到配方的問題上，僅提供思路，具體配方請自己摸索.

緩衝液的構成一般是：PBS(或其他緩衝體系)+作用物質(針對某一特定問題)+PH調整.在參考過以前的各種資料後，個人意見為配方原則為宜簡不宜繁，根據自己的需要添加作用物質，原來的很多需要添加的作用物質，由於膜製造技術的改進已經不再需要.

推薦的緩衝體系為0.01MPBSPH7-7.2，該緩衝體系對多種抗原抗體都有良好的適應性.

作用物質的情況大致羅列如下：

少量NACL，減少信號強度，消假陽.

有機醇(甲醇，異丙醇等)，潤濕膜，減少膜帶有的靜電，利於結合包被.個人不推薦，因制膜工藝改進.

表面活動劑(TW20，TX100)，增加親水力，可避免線條中空現象，也可增色.

糖，保護劑，減緩老化速度，也可以增加親水力同上.

調PH到某個位置，可以消假陽.

4.點樣環境

環境濕度對點膜過程非常重要.最佳濕度一般在45-65%.

濕度過低，膜上容易聚集靜電荷，點膜容易出現散點，導致測試會出現疏水斑.

濕度過高，膜上毛細作用加強，點膜容易引起CT線變寬甚至擴散.

為了保證點樣時膜濕度的均一性，一般在點樣前把膜放到該濕度條件下平衡一段時間.

5.點樣儀器與膜面情況的關係

目前有兩種點樣方式，劃膜式和非接觸點膜式.非接觸點膜式優於劃膜式，進口劃膜式優於國產劃膜式.

因劃膜式為軟管將抗體劃到膜表面，而膜本身的物理性質為軟脆，劃管會在其表面留下印痕.進口的劃膜機由於使用的材料和控制系統較好，所以留下的劃痕較輕，而國產儀器較差，留下的劃痕也就比較嚴重.劃痕容易對層析的金標複合物形成阻力，導致假陽性.同時容易出現跑板時在T線位置出現若有若無一條細線(鬼線)，而跑板結束後鬼線消失的奇怪現象.

6.膜的寬度與點樣位置

膜的寬度一般有18mm(or20mm)和25mm兩種，分別使用在做測試條和做測試板上.

然而，不同的T線點樣位置將帶來不同的靈敏度.點樣位置上移，金標複合物通過T線位置時速度變慢，反應時間增加，靈敏度升高.反之靈敏度降低.這個方法可以用來改變靈敏度和消除假陽性。