怎麼測定唾液澱粉酶的最適ph
唾液澱粉酶(pancreaticamylase)是由唾液腺分泌的一種水解酶,而澱粉經唾液中澱粉酶的水解,生成糊精和麥芽糖。而知道唾液澱粉酶的最適ph對於自身有好處,那麼唾液澱粉酶的最適ph是多少呢,又應該怎麼測定唾液澱粉酶的最適ph?
在底物過量的條件下,相同時間內,在溫度、酶濃度相同的條件下,接近最適 pH 的反應體系中消耗澱粉的量最大,剩餘澱粉與過量碘液生成的顏色越淺,吸光度越小,利用分光光度計測出各管的吸光度後, 取處於升高與降低趨勢之間的較小吸光度範圍對應的 pH 值即為唾液澱粉酶的最適 pH。
一、 材料與方法 儀器:吸量管(5mL,1mL) ,試管,試管架,小燒杯, 722 型分光光度計,恒溫箱,吸耳球 試劑:0.01mol/L 碘液,0.2mol/L 磷酸氫二鈉,0.2mol/L 磷酸二氫鈉,澱粉溶液,唾 液,蒸餾水
二、方法:相同時間內,在溫度、酶濃度相同、pH 不同的條件下,酶的活度不同,水解的澱粉量不同,剩餘的澱粉與過量碘液生成的顏色不同,通過在660nm測量吸光度,得出酶的最適 pH 範圍。
操作步驟:
1、唾液的獲取:蒸餾水漱口後在口中含蒸餾水,適宜時間後將蒸餾水連同唾液一同放置於事先準備好的容器中即可,在實驗過程中應注意酶的失活,為了防止此現象發生應將此液體置於冰水中冷卻。
2、不同pH緩衝液配製:根據下表配置各個pH值的緩衝溶液各10ml
3、澱粉用量的確定(為了更好觀察顏色變化,可以加入適量蒸餾水使總體積相同。混勻,觀察現象,並選擇顏色變化適中一支,記錄其用量。)
4、酶液稀釋倍數確定(為了更好觀察顏色變化,可以加入適量蒸餾水使總體積相同,混勻,觀察現象,並選擇適中一支,記錄其稀釋倍數。)
5、最適pH確定(蒸餾水調零,測定660nm處吸光度A,最後以A為縱坐標,pH為橫坐標作圖,取曲線最低點對應的pH值,即為唾液澱粉酶的最適pH值。)
從上述的實驗中或許可以得出6.8為曲線最低點對應的pH值,即為唾液澱粉酶的最適pH值。但是需要注意的是澱粉酶的測定結果受方法的影響較大,怎麼測定唾液澱粉酶的最適ph?不同方法參考值亦有所不同,臨床所用方法也較多,因此必須瞭解所用測定方法和其參考值,才能作出正確的診斷。