飲用水中大腸桿菌檢測方法是什麼
大腸桿菌是比較常見的細菌,對於人體是有害的,常見於我們的飲用水當中,要是長時間的飲用含有大腸桿菌的水的話,對於身體的傷害是很大的。對此,要檢查水中的大腸桿菌。那飲用水中大腸桿菌檢測方法是什麼?這個問題,很多的朋友都很好奇,下面就為大家簡單的介紹一下。
飲用水中大腸桿菌檢測方法是什麼?
1、飲用水中大腸桿菌快速檢測方法,其特徵在於包括以下步驟:
(1)水樣中微生物的收集及其DNA的提取: 採用滅菌後的濾膜或濾器過濾水樣,在裝有無菌水的EP管中,洗滌濾膜,離心, 棄上清液,備用;
(2)水樣中微生物DNA的提取: A、向EP管中加入TE緩衝液,使之重懸; B、加入SDS和蛋白酶K,混勻,溫育45min~1h; C、加入氯仿/異戊醇,混勻,離心,將上清液轉入一個新EP管中; D、加入等體積的酚/氯仿/異戊醇,混勻,離心,將上清液轉入一個新EP管中; E、加入異丙醇,輕輕混合直到DNA沉澱下來,離心; F、棄上清,沉澱物用乙醇洗滌,晾乾; G、將沉澱重溶於TE緩衝液,搖勻; H、用紫外分光光度計測定提取的基因組DNA範本的0D值,計算其DNA濃度,計算方 法為: DNA濃度(μg/μL)=OD值260nm×樣品稀釋倍數×50/1000 I、將基因組DNA範本做好標記,貯存,備用;
(3)PCR擴增; 反應引物: 上游引物:5’-tgttcagtggcaagagtt-3’ 下游引物:5’-taatcgatatacccgctc-3’ 50μL反應體系: 10×PCR緩衝液5μL Tag酶2U/μL1μL MgCl2(25mM)5μL dNTP(2.5MM)5μL ddH2029μL 上游引物10μM2μL 上游引物10μM2μL 範本DNA1.5μg/μL1μL
(4)產物觀察: A、凝膠的準備:先配置瓊脂糖溶液,加熱,使其充分溶解,再加入溴化乙錠溶液; B、配置TAE電泳液; C、倒膠:將配置好的瓊脂糖溶液倒入膠板中,待其凝固後,放入電泳槽中; D、電泳:將擴增好的PCR產物與緩衝液按比例混合,加入到凝膠加樣孔中,同時加入 DNA分子量標準,接通電源,設定電壓和電流,開始電泳。 E、觀察;將擴增產物在紫外光下觀察,拍攝圖片。
上文就是關於飲用水中大腸桿菌檢測方法是什麼的介紹,現在大家瞭解了吧!其實可要我們不喝生水,飲用經過燒開的水,就沒有這些問題了。這就是為什麼總是提倡大家和涼開水的原因。而且多喝涼開水對身體是很有好處的,無論是男女老少。