蛋白質的檢測方法有哪些
如今社會的發展速度最快,蛋白質含量常規檢測是大家最為關注的問題。在眾多的蛋白質含量常規檢測方法當中,蛋白質的理化性質及反應眾多,光是顯色反應就達十餘種,每一種或一類性質就意味著一條檢測途徑,因此能夠用於檢測蛋白質的方法多種多樣。那麼,蛋白質的檢測方法有哪些?
(一)蛋白質的鹽析 取1.5mL 蛋白質溶液,加入等體積飽和硫酸銨溶液(濃度為50%飽和),微微搖動試管, 使溶液混合均勻後,靜置數分鐘,球蛋白即析出呈絮狀沉澱(如無沉澱可再加少許飽和硫酸 銨),用濾紙濾取上清液,濾液中再加入固體硫酸銨粉末至不再溶解,析出的即為清蛋白,再 加水稀釋,觀察沉澱是否溶解。
(二)蛋白質的沉澱 1.用重金屬鹽沉澱蛋白質 取三支試管,各加1mL 蛋白質溶液,分別各加3 滴6%醋酸鉛溶液、3 滴2%硫酸銅溶 液和3 滴1%硝酸銀溶液,觀察蛋白質沉澱的析出。 2.用有機酸沉澱蛋白質 取二支試管,各加1mL 蛋白質溶液,並加5%醋酸溶液使之呈酸性(該沉澱反應最好在 弱酸中進行)。然後分別滴加飽和苦味酸、飽鞣酸溶液,直至沉澱產生為止。 用10%三氯醋酸溶液、3%磺柳酸溶液進行類似實驗(用量同前),觀察現象。 (三)蛋白質的顏色反應 1.黃蛋白反應 於試管中,加1mL 蛋白質溶液和10 滴濃硝酸溶液,直火加熱煮沸,觀察溶液和沉澱顏色。 冷卻後,再加入20 滴10%氫氯化鈉溶液,觀察顏色變化。 2.與茚三酮的反應 在二支試管中,分別加1%賴氨酸溶液和1mL 蛋白質溶液,分別加2 滴茚三酮溶液,加 熱至沸,觀察有什麼現象? 3.與硝酸汞試劑作用——米倫反應 在二支試管中,分別加 1mL 0.5%苯酚溶液和1mL 蛋白質溶液,再各加 0.5mL 米倫試劑 (不可太多),苯酚溶液出現玫瑰紅色,而蛋白質溶液加熱後出現沉澱,加熱凝固的蛋白質呈 磚紅色,有時溶液也呈紅色。 4.蛋白質的雙縮脲反應
(1) 雙縮脲的生成 於乾燥試管中,加0.2g~0.3g 尿素,微火加熱,尿素熔化並形成雙縮脲,放出的氨可用 紅色石蕊試紙試驗。試管內有白色固體出現後,停止加熱。(2) 雙縮脲反應 上述產物冷卻後,加1mL10%氫氧化鈉溶液,搖勻,再加2 滴2%硫酸酮溶液,混勻,觀察 有無紫色出現。 於試管中,加1mL 清蛋白溶液和1mL10%氫氧化銅溶液,再加1 滴~2 滴2%硫酸銅溶液共 熱,由於蛋白質與硫酸銅生成絡合物而呈紫色。取1%賴氨酸溶液作對照,觀察顏色變化。
(四) 核蛋白組成的鑒定 1.核蛋白的水解 取20mL 酵母核蛋白混懸液于離心管中離心分離,棄去清液,將沉澱轉入小燒杯中,加 15mL 5%硫酸,蓋上表面皿在水浴上煮沸約1h(煮沸過程中保持原有體積),水解畢,離心分 離,取上層清液作以下檢查。 2.核糖的鑒定 於試管中,加 1mL 20%間苯二酚鹽酸溶液,以小火加熱至沸,迅速加入 5 滴水解液, 呈現紅色,(如紅色不顯可再稍加熱)。 3.磷酸的鑒定 取10 滴水解液,置於試管中,加5 滴7%鉬酸銨溶液和2 滴濃硝酸溶液,小心於火上 加熱,即有黃色沉澱生成。 4.嘌呤與嘧啶的鑒定 取約4mL 水解液,置於小燒杯中,加入氨水至微鹼性,過濾,在濾液中加1mL 5%硝酸 銀銨溶液,靜置片刻,即有絮狀的嘌呤或嘧啶銀鹽沉澱生成。 注意事項 米倫試劑是硝酸、亞硝酸、硝酸汞及亞硝酸汞之混合物,能與苯酚及某些酚類起顏色反應。
通過以上對蛋白質的檢測方法有哪些的簡單介紹,大家應該對這些有所知道了吧。這裡要提醒的是:當大家在生活中不幸被蛋白質的檢測方法疾病所困擾之後,必須要注意把握好治療蛋白質的檢測方法疾病的方向,從原理的方面出發,這樣才能讓大家從根本上知道蛋白質的檢測方法。